Polipeptidlarning erishi
Har bir aminokislota o'ziga xos kimyoviy xususiyatlarga ega va peptidning eruvchanligi uning ketma-ketligi va modifikatsiyasiga bog'liq. Barcha peptidlarni eritishdan oldin eruvchanlikni tekshirish uchun peptidning oz miqdorini olishni tavsiya etamiz.
Peptidlarni eritish juda muhim qadamdir. Noto'g'ri eritish peptid yo'qolishiga yoki eksperimental muvaffaqiyatsizlikka olib kelishi mumkin. Peptidlarning eruvchanligi asosan peptidning ketma-ketligiga bog'liq, shuning uchun peptidni loyihalashda e'tibor bering. Peptidlar ketma-ketligi eruvchanligini oshirish uchun 20% zaryadlangan qoldiqlarni o'z ichiga olishi tavsiya etiladi.
Foydalanishdan oldin mijozlar peptidni eritish uchun mos hal qiluvchi tanlash uchun quyidagi uchta asosiy tamoyilga amal qilishlari mumkin.
Birinchidan, tanlangan erituvchi peptidni to'liq eritishi kerak; Ikkinchidan, tanlangan erituvchi tajriba sharoitlariga mos kelishi kerak; Nihoyat, tanlangan erituvchi peptid bilan reaksiyaga kirishmasligi yoki buzilmasligi kerak.
Peptid miqdori imkon bergan ekan, avval peptidning kichik bir qismini eritib, keyin butun namunani eritib yuborishingiz mumkin. Agar siz peptidni erituvchidan qaytarib olishingiz kerak bo'lsa, liyofilizatsiyadan keyin uni olib tashlashni osonlashtiradigan dastlabki erituvchini tanlashingiz mumkin.
Quyidagi tavsiyalar peptidlarni eritishga yordam beradi:
5 dan kam aminokislotalar bo'lgan peptidlar odatda suvli eritmalarda eriydi va kuchli hidrofobik aminokislotalar (W, I, L, F, M, V, Y) bundan mustasno.
If the charged amino acids are evenly distributed throughout the sequence, then contains >25% gidrofil peptidlarning zaryadlangan aminokislotalar (E, D, K, R, H) va tarkibida<25%Peptides with hydrophobic amino acids are generally soluble in aqueous solutions. The purification system for peptides is generally 0.1% TFA/Water and 0.1% TFA/ ACN. Therefore, if the peptide is dissolved in a buffer with no or very weak buffering capacity, the result may be an acidic peptide solution. When using other methods to dissolve peptides, be sure to use a solvent that is pH The value is nearly neutral. acidic peptide (E+D The number of residues is more than K+R+H number of residues) and basic peptides (K+R+H The number of residues is more than E+D number of residues) in neutral pH value conditions than in acidic pH value is easier to dissolve.
For hydrophobic amino acid content is 50% ～75%peptide, even if the sequence contains >25% Zaryadlangan aminokislotalar ham suvda erimaydigan yoki qisman eriydigan bo'lishi mumkin. Avval peptidni DMF, ACN, izopropil spirti, etanol, sirka kislotasi, 4-8 M GdnHCl, karbamid yoki DMSO (C, W, M ketma-ketlikda emas) va boshqa shunga o'xshash organik erituvchilar kabi kuchli organik erituvchilarning minimal miqdorida eritish yaxshidir. Suvli eritma ichiga peptidni erituvchi organik erituvchini sekin-sekin tomchilab qo'shish yaxshidir. Agar eritma loyqa bo'lib qolsa, u eruvchanlik chegarasiga yetgan bo'lishi mumkin va uni eritishni davom ettirishdan foyda yo'q. Shuni ta'kidlash kerakki, dastlab tanlangan erituvchi eksperimental tizimga mos kelishi kerak.
Hydrophobic amino acid content >75% Kuchli hidrofobik peptidlar odatda suvli eritmalarda ham erimaydi. Bunday peptidlar birinchi navbatda kuchli organik erituvchilar (masalan, TFA, chumoli kislotasi) bilan ishlov berilishi kerak va ular suvli eritmaga qo'shilsa, cho'kishi mumkin. Yakuniy peptid eritmasi uni denatüratsiya qilish uchun yuqori konsentratsiyali organik erituvchilarni talab qilishi mumkin va organik erituvchilar odatda tirik hujayralardagi biologik funktsiyalarni o'rganish uchun ishlatilmaydi.
S, T, E, D, K, R, H, N, Q, Y High content (>75% Polipeptid ketma-ketligi ortiqcha molekulalararo vodorod bog'lanish tarmoqlarini hosil qiladi va konsentrlangan suvli eritmalarda osonlikcha jel hosil qiladi. Bunday peptidlarni 3-bosqichda ta'riflanganidek eritish mumkin. Eritma paytida yuzaga kelishi mumkin bo'lgan muammolarni kamaytirish uchun mijozlarga peptidning eruvchanligini yaxshilash uchun dizayn va ketma-ketlikka ko'proq e'tibor berish tavsiya etiladi.